Что надо знать, чтобы начать клонировать?
Плазмиды – это кольцевые внехромосомные молекулы ДНК бактерий, которые могут быть использованы в генетической инженерии для клонирования или экспрессии, как в прокариотических, так и в эукариотических системах. Обязательные элементы любой плазмиды – это наличие бактериального ориджина репликации и наличие гена устойчивости к антибиотикам. Ниже представлено краткое описание основных структурных и функциональных элементов плазмид:
После встройки какой-либо последовательности в плазмиду её первичная наработка производится в прокариотической системе – в бактериях Escherichia coli, (E. coli, кишечная палочка). Это грамотрицательная бактерия, которая является естественным симбионтом кишечника человека и животных. В клонировании используют лабораторные штаммы E. coli, в которых есть ряд мутаций, обеспечивающих стабильность плазмид и клонируемых последовательностей. Ниже приведены наиболее распространенные лабораторные штаммы E. coli и характеристики их генотипов:
В качестве селективных маркеров могут быть использованы разные гены устойчивости к антибиотикам, в зависимости от задач эксперимента. Некоторые антибиотики, используемые в генетической инженерии, приведены в таблице ниже:
Для чтения карт плазмид и последовательностей важно также знать буквенные обозначения нуклеотидов и аминокислот. Мы приводим их в таблицах ниже:
НУКЛЕИНОВЫЕ КИСЛОТЫ
АМИНОКИСЛОТЫ
Также в плазмидах могут быть использованы различные эпитопы, которые будут частью синтезируемого белка. К этим эпитопам могут быть доступны коммерческие антитела, либо они могут быть удобны для хроматографии и адсорбции. Ниже приведены наиболее часто встречающиеся эпитопы:
Использованы материалы addgene.org
Для получения более детальной информации свяжитесь со специалистами DUOX BIOTECHNOLOGIES и мы Вам поможем провести дизайн генетических конструкций, необходимых для вашей работы.