Иммортализация клеток эукариот
В работе исследователей часто возникает необходимость получения постоянных клеточных линий из первичных клеток. Например, при изучении различных заболеваний человека у пациентов можно взять образец венозной крови или биопсию ткани и получить из этого материала кратковременную клеточную линию. Такие клетки обычно используют для широкого спектра различных исследований. В частности, для создания подходов персонализированной медицины для конкретного пациента, наработки большого количества биоматериала для выделения ДНК и серий полногеномного секвенирования и так далее. Для всех перечисленных подходов получение иммортализованной линии создает ряд преимуществ, так как снимаются ограничения на количество материала. Кроме того, из первичных клеток пациентов можно получить постоянную клеточную линию — модель какого-либо заболевания.
Для иммортализации клеток используются различные подходы, выбор которых зависит от типа иммортализуемых клеток, а также от целей и задач эксперимента (рис. 1А).
Для иммортализации клеток используются различные подходы, выбор которых зависит от типа иммортализуемых клеток, а также от целей и задач эксперимента (рис. 1А).
Рисунок 1. А. Методы иммортализации эукариотических клеток. Б. Получение иммортализованных эмбриональных фибробластов курицы [doi.org/10.1038/s43016-022-00658-w].
Самый простой подход — это получение спонтанно иммортализованных клеток. Например, с его помощью была разработана методика получения искусственного куриного мяса из эмбриональных куриных фибробластов [doi.org/10.1038/s43016-022-00658-w]. В ходе работы, в течение длительного культивирования, удалось получить колонии иммортализованных клеток среди старой и погибающей культуры (рис. 1Б). Иммортализацию полученных клеток подтверждали по профилю экспрессии соответствующих генов, а затем, путем наработки биоматериала, получали искусственное мясо. Метод спонтанной иммортализации позволяет получать перевиваемые клеточные линии без каких-либо генетических манипуляций со стороны исследователя, но требует очень продолжительного времени и не дает гарантии того, что иммортализация произойдет.
Один из самых эффективных подходов иммортализации основан на использовании кондиционированной питательной среды, в которой культивировали клетки, заражённые вирусом Эпштейна-Барр, одним из самых распространённых вирусов человека [doi.org/10.1007/BF02633976]. Большим преимуществом данного метода является то, что в некоторых случаях эффективность иммортализации достигает 98% и не происходит крупных хромосомных перестроек. Однако минусом методики остаётся её применимость только для некоторых типов клеток, восприимчивых к вирусу.
Еще один метод, обладающий очень высокой эффективностью и универсальностью, основан на доставке в клетки трансгена, кодирующего каталитическую субъединицу теломеразы либо большой T-антиген вируса SV40. Также очень эффективно использовать оба трансгена одновременно [doi.org/10.1038/sj.onc.1205014]. Выбор трансгена зависит от типа клеток, которые необходимо иммортализовать, и от вида организма, чьи клетки используются в работе. Ограничения такого подхода основаны, в первую очередь, на восприимчивости клеток к чужеродной ДНК, то есть на том, насколько эффективно их можно трансфецировать. При этом сохраняется возможность иммортализации плохо трансфецируемых клеток за счет высокой иммортализационной эффективности трансгена.
В зависимости от типа клеток, которые нужно иммортализовать, подбирается метод, наиболее эффективный в конкретном случае.
Наша компания предлагает иммортализацию:
1. В-лимфоцитов периферической венозной крови человека.
2. Фибробластов любых млекопитающих и птиц.
3. Других типов клеток, для которых мы подберем наиболее эффективный метод.
Для проведения иммортализации вам необходимо обратиться к нашим специалистам, и в контакте с вами мы подберем самый оптимальный метод, который позволит в самые короткие сроки получить для вас перевиваемую линию клеток. По результатам работы вы получите живые клетки в том количестве, которое вам необходимо, и, при необходимости, информацию о профилях экспрессии генов и маркеров иммортализации.
Один из самых эффективных подходов иммортализации основан на использовании кондиционированной питательной среды, в которой культивировали клетки, заражённые вирусом Эпштейна-Барр, одним из самых распространённых вирусов человека [doi.org/10.1007/BF02633976]. Большим преимуществом данного метода является то, что в некоторых случаях эффективность иммортализации достигает 98% и не происходит крупных хромосомных перестроек. Однако минусом методики остаётся её применимость только для некоторых типов клеток, восприимчивых к вирусу.
Еще один метод, обладающий очень высокой эффективностью и универсальностью, основан на доставке в клетки трансгена, кодирующего каталитическую субъединицу теломеразы либо большой T-антиген вируса SV40. Также очень эффективно использовать оба трансгена одновременно [doi.org/10.1038/sj.onc.1205014]. Выбор трансгена зависит от типа клеток, которые необходимо иммортализовать, и от вида организма, чьи клетки используются в работе. Ограничения такого подхода основаны, в первую очередь, на восприимчивости клеток к чужеродной ДНК, то есть на том, насколько эффективно их можно трансфецировать. При этом сохраняется возможность иммортализации плохо трансфецируемых клеток за счет высокой иммортализационной эффективности трансгена.
В зависимости от типа клеток, которые нужно иммортализовать, подбирается метод, наиболее эффективный в конкретном случае.
Наша компания предлагает иммортализацию:
1. В-лимфоцитов периферической венозной крови человека.
2. Фибробластов любых млекопитающих и птиц.
3. Других типов клеток, для которых мы подберем наиболее эффективный метод.
Для проведения иммортализации вам необходимо обратиться к нашим специалистам, и в контакте с вами мы подберем самый оптимальный метод, который позволит в самые короткие сроки получить для вас перевиваемую линию клеток. По результатам работы вы получите живые клетки в том количестве, которое вам необходимо, и, при необходимости, информацию о профилях экспрессии генов и маркеров иммортализации.